体外活性实验表明Houttuynoid E具有很强的抗幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori，Hp)活性。HouttuynoidE可用于急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病的治疗及在制备治疗急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡药物中得到应用。本发明涉及的HouttuynoidE在制备治疗抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽门螺杆菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽门螺杆菌感染的防治显然具有显著的进步。
1.Houttuynoidxa0E在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用，所述化合物Houttuynoidxa0E结构如式（Ⅰ）所示：ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="313"/>式（Ⅰ）。技术领域
本发明属于生物制药技术领域，尤其涉及Houttuynoidxa0E在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用。xa0
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacterxa0pylori，Hp)是一种革兰氏阴性螺旋状细菌。研究显示，幽门螺杆菌是急、慢性胃炎以及胃、十二指肠溃疡的主要致病原因,并可能与胃癌和胃粘膜相关性淋巴样组织(MALT)恶性淋巴瘤发病有关。最近，世界卫生组织将Hp归为I类致癌物，它在胃癌发展中起主导作用。目前流行的治疗Hp感染的方案是同时服用质子泵抑制剂（PPI）加两种抗生素（克拉霉素，阿莫西林、四环素、甲硝唑等选二种）的三联疗法。影响三联疗法的最主要因素被认为是Hp对抗菌剂的耐药性；另一严重问题是质子泵抑制剂会诱发消化不良，大量抗菌剂则导致消化道内菌群的严重毁灭。因此，寻找高效、安全的抗Hp活性一类新药物成为一个重要和迫切的任务。xa0本发明涉及的化合物Houttuynoidxa0E是一个2012年发表（Chen,xa0S.xa0D.xa0etxa0al.,xa02012.xa0Houttuynoidxa0E_E,xa0Anti-Herpesxa0Simplexxa0Virusxa0Activexa0Flavonoidsxa0withxa0Novelxa0Skeletonsxa0fromxa0Houttuyniaxa0cordata.xa0Organicxa0Lettersxa014xa0(7),xa01772–1775.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及抗单纯疱疹病毒活性（Chen,xa0S.xa0D.xa0etxa0al.,xa02012.xa0Houttuynoidxa0E_E,xa0Anti-Herpesxa0Simplexxa0Virusxa0Activexa0Flavonoidsxa0withxa0Novelxa0Skeletonsxa0fromxa0Houttuyniaxa0cordata.xa0Organicxa0Lettersxa014xa0(7),xa01772–1775.），对于本发明涉及的Houttuynoidxa0E在制备治疗抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽门螺杆菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽门螺杆菌感染的防治显然具有显著的进步。xa0
发明内容
本发明的目的是研究Houttuynoidxa0E在抗幽门螺杆菌药物中的应用。所述化合物Houttuynoidxa0E结构如式（Ⅰ）所示：xa0ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>Houttuynoidxa0E的体外实验表明，Houttuynoidxa0E具有很强的抗幽门螺旋杆菌活性，纸片法显示其抑菌圈直径为19xa0mmxa0(ATCC43504)。用琼脂稀释法显示它能完全抑制5个随机的临床菌株（Hp001、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036）和1个标准菌株xa0(ATCC43504)的生长，最小抑菌浓度（MIC）均为1.0xa0μg/ml。用氨苄西林作阳性对照，其对6株测试菌完全抑制的最小浓度（MIC）为2.0xa0μg/ml。xa0本研究结果显示，Houttuynoidxa0E的抑制幽门螺旋杆菌活性的能力比氨苄西林强，说明对于与幽门螺旋杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病来讲，Houttuynoidxa0E是一个极具开发潜力的化合物。它可直接用于相应疾病的治疗以及相关药物的制备。xa0本发明涉及的Houttuynoidxa0E在制备治疗抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽门螺杆菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽门螺杆菌感染的防治显然具有显著的进步。xa0
具体实施方式
本发明所涉及化合物Houttuynoidxa0E的制备方法参见文献（Chen,xa0S.xa0D.xa0etxa0al.,xa02012.xa0Houttuynoidxa0E_E,xa0Anti-Herpesxa0Simplexxa0Virusxa0Activexa0Flavonoidsxa0withxa0Novelxa0Skeletonsxa0fromxa0Houttuyniaxa0cordata.xa0Organicxa0Lettersxa014xa0(7),xa01772–1775.）。xa0以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。xa0实施例1：本发明所涉及化合物Houttuynoidxa0E片剂的制备：xa0取20克化合物Houttuynoidxa0E，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。xa0实施例2：本发明所涉及化合物Houttuynoidxa0E胶囊剂的制备：xa0取20克化合物Houttuynoidxa0E，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。xa0下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。xa0Houttuynoidxa0E的药理实验xa01）供试菌株xa0幽门螺杆菌(Helicobacterxa0pylori，Hp)标准菌株ATCCxa043504购于美国菌种保存中心(Americanxa0Typexa0Culturexa0Collection，ATCC)。15株Hp临床菌株采自江苏省人民医院消化科、江苏省中医院检验科和南京市儿童医院胃镜室接受胃镜检查的患者；在连续胃镜检查中对消化性溃疡、十二指肠球炎或疣状胃炎的患者，先经快速尿素酶实验确定为Hp阳性者，再取胃窦黏膜1-2块，切碎后接种于含8%马血清、三甲氧苄氨嘧啶（trimethropin,xa0TMP）1.25xa0g/L、多粘菌素（polymyxin）B2500xa0U/L、万古霉素(vancomycin)10xa0mg/L的Columbia选择性琼脂培养基中，于37xa0°C在微氧环境下(5%xa0O₂,xa010%xa0CO₂xa0和xa085%xa0N₂)培养72小时。收集细菌，经涂片革兰氏染色，氧化酶、触酶和尿素酶鉴定为阳性后，传代纯培养，所得菌株作为实验菌株。xa02）菌株培养xa0我们采用微需氧袋（购自上海医科大学）进行HP的菌株培养，它可通过化学反应产生Hp所需要的微需氧环境。xa03）生物活性测定xa0采用纸片法（Microbiologicalxa0paperxa0method）测定化合物对幽门螺杆菌的抑制作用，用琼脂稀释法来测定供试样品的最低抑菌浓度(minimalxa0inhibitoryxa0concentration,xa0MIC)。xa0I.xa0纸片法实验xa0(A)xa0准备培养基xa0将配制好的Columbia培养基经高压蒸汽灭菌后，冷却至50-60℃，加8%马血清或绵羊血，混匀倾注于已经灭菌的培养皿中，每皿7-10xa0ml，培养基厚度为1.5xa0mm(无菌操作)。xa0(B)xa0转接实验菌（涂菌）xa0用微量取样器取稀释好的10⁸CFU/mlxa0(1OD₆₆₀=10^8xa0CFU/ml)Hp的菌悬液0.1xa0ml均匀地涂抹在适宜的培养皿表面。倒置于37oC烘干箱中15xa0min后取出，目的使琼脂表面干燥，备用。xa0(C)xa0贴样品纸片xa0用微量取样器取6xa0μl待测样品xa0(质量浓度2xa0mg/ml)xa0注入已经灭菌的圆滤纸片上。用无菌镊子镊取含样品的纸片和对照空白纸片，按无菌操作分别纸片紧贴于含菌琼脂表面，每隔一定距离贴一张纸片。每种菌做3皿，所得结果求其平均值。xa0(D)xa0培养xa0将各平皿置于微需氧袋中，封口，打开气体发生器，再置于37oC培养箱中培养72h。xa0(E)xa0测抑菌圈直径xa0xa0取出平板后，分别测量各纸片周围抑菌圈直径的大小。参照对照组的结果，可得出待测样品敏感实验的结果。重复三次。xa0II.琼脂稀释法测定MICxa0(A)xa0药物平板的制备xa0首先将测试的化合物用二甲基亚砜（DMSO）溶液配制成0.5xa0mg/ml的母液，再用无菌水稀释，最终配成10.0，8.0，6.0，4.5，4.0，3.5，3.0，2.5，2.0，1.5，1.0，0.5和0.25xa0μg/ml的浓度系列，DMSO在介质中的浓度小于1%。将1xa0ml配制好的测试化合物溶液与保温于50°Cxa0的9xa0ml哥伦比亚培养基另加1xa0ml保温于50xa0°C的马血清充分混匀，浇制入培养皿中冷却即成。xa0(B)xa0转接实验菌（涂菌）xa0用微量取样器吸取稀释好的1×10⁸xa0CFU/mlxa0Hp的菌悬液0.1xa0ml均匀地涂抹在培养皿表面，倒置于37oC烘干箱中15xa0min后取出，目的使琼脂表面干燥，备用。xa0(C)xa0确定MICxa0将待测培养皿在微需氧袋(含：85%xa0N₂,xa010%xa0CO₂和5%xa0O₂)中，保温37^oC培养72小时，观察Hp生长情况，与空白组相对照，以完全没有菌生长的样品最低浓度为最低抑菌浓度(minimalxa0inhibitoryxa0concentration,xa0MIC)值。阳性对照为氨苄西林(Ampicillin)。xa03、Houttuynoidxa0E的药理实验结果xa0体外实验表明，Houttuynoidxa0E具有很强的抗幽门螺旋杆菌活性，纸片法显示其抑菌圈直xa0径为19xa0mmxa0(ATCC43504)。用琼脂稀释法显示它能完全抑制5个随机的临床菌株（Hp001、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036）和1个标准菌株xa0(ATCC43504)的生长，最小抑菌浓度（MIC）均为1.0xa0μg/ml。用氨苄西林作阳性对照，其对6株测试菌完全抑制的最小浓度（MIC）为2.0xa0μg/ml。xa0结论：Houttuynoidxa0E抑制幽门螺旋杆菌活性的能力比氨苄西林强，说明对于与幽门螺旋杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病来讲，Houttuynoidxa0E是一个极具开发潜力的化合物。它可直接用于相应疾病的治疗以及相关药物的制备。xa0